 Wysłany: Pon 21:53, 17 Wrz 2007 Temat postu: |
|
| To super!!!!Cieszę się, że działa i oby tak dalej!! | |
| Wysłany: Pon 14:33, 17 Wrz 2007 Temat postu: Etanol hmmm szkoda tego alko |
|
| Dziala tylko trzeba wydluzyc inkubacje w -20 stopniach. Widac dobrze precypitat ale potem jak sie odwirowuje mozna sie zdziwic bo mimo ze wirowanie w 4 stopniach to precypitatu wogole nie zauwazysz. Potem po przemyciu 70 alko trzeba dlugo czekac az calkiem odparuje (bo jak zostanie troche to potem interferuje podczas sekwencjonowania wszystkie syfy widac) i sie rozpuszcza w TE. DZIALA. | |
| Wysłany: Śro 20:36, 12 Wrz 2007 Temat postu: |
|
| Kurcze ja kitem robiłam, więc nic z własnego doświadczenia, pewnie w google szukałaś już...ja trafiłam na takie m.in. strony
http://omrf.ouhsc.edu/~frank/ETOHPPT.html http://userpages.umbc.edu/~jwolf/m5.htm http://mycoplasmas.vm.iastate.edu/lab_site/methods/DNA/precip.html to coś po polsku, ale nie wiem czy się w ogóle przyda http://www.pg.gda.pl/chem/Katedry/Leki/augustin/instrukcje/izolacja%20DNA%20z%20komorek%20zwierzecych.pdf http://www.eurx.com.pl/mod.php?dz=101&idown=&mod=Asers_Shop&s_op=viewproductdetails&lid=408&cid=881&hmany=2&mright= Pewnie już to wszystko przeglądałaś wcześniej, ale na nic konkretnego nie wpadałam |
|
| Wysłany: Śro 13:09, 12 Wrz 2007 Temat postu: Precypitacja Etanolem czyli pseudokoncetracja DNA |
|
| Tak sobie pomyslalam a noz widelec Przemek sie pojawi albo wy wymyslicie albo znajdziecei na necie cos wiecej niz ja znalazlam.
Probrem jest natury chemiczno technicznej i polega na tym ze stosujac precypitacje etanolem 100 i innymi odczynnikami stezenie DNA nadal pozostaje takie samo jak wczesniej.Biorac pod uwage ze poczatkowo mialam np 100ul stezenia 0,01 a w efekcie dostaje 10ul 0,01 mozna powiedziec ze bo prodze zgubilam nawet troche(nie troche tylko wiele) DNA. stosuje taka procedure : do 100ul proby dodaje 100ul mieszaniny chloroform fenol mieszam wiruje 1300rpm 1min zbieram faze wodna i dodaje kolejno 36ul 7,5 M ammonium acetate 2ul glikogenu(10mg/ml) i 270ul czystego etoh inkubuje w -20 30min wiruje 20min 1300 usuwam supernatant plucze 70%etoh usuwam supernatant zawieszam w 10ul buforu TE ph8 Czekam na poprawki z waszej stronu strzala |
|